Chromotek實(shí)驗(yàn)免疫試劑盒用戶指南

——精準(zhǔn)捕獲，賦能蛋白研究

一、產(chǎn)品概述

Chromotek公司成立于2008年，是納米抗體（Nanobody®）技術(shù)的全球，其開發(fā)的GFP-Trap®、RFP-Trap®等試劑盒已成為熒光蛋白標(biāo)記蛋白研究的金標(biāo)準(zhǔn)。通過將納米抗體與瓊脂糖珠、磁珠等基質(zhì)偶聯(lián)，Chromotek試劑盒可高效、特異性地富集目標(biāo)蛋白，廣泛應(yīng)用于免疫沉淀（IP）、染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）、免疫熒光（IF）等實(shí)驗(yàn)。

二、核心優(yōu)勢

1. 高親和力與特異性

• 解離常數(shù)（KD）：GFP-Trap®與GFP的KD值低至1 pM，遠(yuǎn)低于傳統(tǒng)抗體（nM級）。

• 交叉反應(yīng)：與山羊、小鼠、大鼠或人抗體無顯著同源性，避免非特異性結(jié)合。

2. 操作便捷性

• 磁珠/瓊脂糖珠雙選擇：磁珠（如GFP-Trap®_M）支持磁力分離，瓊脂糖珠（如GFP-Trap®_A）適用于離心操作。

• 一步法洗脫：通過95°C SDS-PAGE緩沖液或甘氨酸-HCl（pH 2.5）快速洗脫，無需復(fù)雜步驟。

3. 應(yīng)用場景多樣性

• IP/Co-IP：驗(yàn)證蛋白-蛋白相互作用。

• ChIP：研究DNA-蛋白結(jié)合。

• IF/IHC：細(xì)胞/組織定位分析。

• Pull-down：體外蛋白相互作用篩選。

三、熱門產(chǎn)品及應(yīng)用領(lǐng)域

應(yīng)用示例：

• 蛋白相互作用研究：使用GFP-Trap®_A從HEK293細(xì)胞中富集GFP-Bub1融合蛋白，通過質(zhì)譜分析鑒定紡錘體組裝檢查點(diǎn)相關(guān)蛋白。

• 表觀遺傳學(xué)：利用Dnmt1-Trap®研究DNA甲基化在DNA修復(fù)中的作用。

• 超分辨率成像：結(jié)合GFP-Booster，在STORM顯微鏡下實(shí)現(xiàn)GFP標(biāo)簽蛋白的納米級定位。

四、技術(shù)參數(shù)與操作指南

（一）產(chǎn)品規(guī)格

• 形式：預(yù)偶聯(lián)瓊脂糖珠/磁珠

• 規(guī)格：250 μg抗體（如GFP-Trap® gt-250）、20次反應(yīng)（如GFP-Trap®_A gta-20）

• 儲存條件：4°C（短期）、-20°C（長期），避免反復(fù)凍融

（二）操作步驟（以GFP-Trap®_A為例）

1. 細(xì)胞裂解

• 收獲細(xì)胞，加入預(yù)冷裂解緩沖液（含蛋白酶抑制劑），冰上孵育30分鐘。

• 14,000 × g離心10分鐘，取上清。

2. 免疫沉淀

• 平衡GFP-Trap®_A：用稀釋緩沖液洗滌2次。

• 加入細(xì)胞裂解液，4°C旋轉(zhuǎn)孵育1小時(shí)。

• 磁力分離或離心，棄上清。

3. 洗滌

• 用洗滌緩沖液洗滌3次，可選增加鹽濃度（150-500 mM NaCl）以提高特異性。

4. 洗脫

• 方案一：95°C SDS-PAGE緩沖液煮沸10分鐘。

• 方案二：0.2 M甘氨酸-HCl（pH 2.5）孵育30秒，立即中和。

5. 分析

• SDS-PAGE、Western Blot或質(zhì)譜分析。

（三）注意事項(xiàng)

• 避免非特異性結(jié)合：洗滌時(shí)確保洗滌緩沖液充分覆蓋珠子。

• 洗脫條件優(yōu)化：對于敏感蛋白，可降低甘氨酸-HCl濃度或縮短孵育時(shí)間。

• 磁珠使用：磁力分離后，用移液器小心去除殘留液體，避免珠子損失。

五、常見問題與解決方案

六、質(zhì)量保證與認(rèn)證

• 嚴(yán)格質(zhì)檢：每批次試劑盒需通過ELISA、SPR、SDS-PAGE等多項(xiàng)檢測。

• ISO 9001認(rèn)證：生產(chǎn)流程符合國際質(zhì)量管理標(biāo)準(zhǔn)。

• 數(shù)據(jù)支持：提供完整的產(chǎn)品說明書、CoA（質(zhì)檢報(bào)告）及文獻(xiàn)引用。